Tách dòng, biểu hiện và tinh sạch nhân tố phiên mã NF-κB p50 của người trong tế bào vật chủ E.coli

Abstract

NF-κB là nhân tố phiên mã quan trọng, đóng vai trò trung tâm trong việc điều khiển hệ thống miễn dịch. Nó tham gia điều khiển trên 500 gen liên quan tới đáp ứng miễn dịch khác nhau trong đó bao gồm cả miễn dịch bẩm sinh và miễn dịch thích ứng. Rối loạn hoạt động của NF-κB có liên quan tới hàng loạt các bệnh ở người như ung thư, các bệnh tự miễn, bệnh liên quan đến phản ứng viêm, nhiễm khuẩn, nhiễm virut và sự phát triển không bình thường của hệ miễn dịch. Trong số 5 nhân tố phiên mã NF-κB ở người, nhân tố phiên mã NF- κB p50 là một trong những nhân tố quan trọng nhất và có mặt trong hầu hết các tế bào của cơ thể người. Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành tách dòng gen mã hóa nhân tố phiên mã NF-κB p50 của người và gắn gen vào vectơ biểu hiện pET-M (là dạng biến đổi của vectơ pET32a). Vectơ tái tổ hợp pET-M mang gen mã hóa NF-κB p50 được biến nạp vào chủng vi khuẩn E.coli BL21(DE3) và biểu hiện thành công protein NF-κB p50. Protein tái tổ hợp NF-κB p50 được tinh sạch bằng phương pháp sắc ký ái lực sử dụng hạt nikel với độ tinh sạch đạt trên 99%. Protein NF-κB p50 có độ tinh sạch cao, có thể sử dụng cho các phương pháp thử nghiệm và sàng lọc các thuốc tiềm năng cho các bệnh liên quan đến rối loạn điều hòa NF-κB.